Kategori garam penampan biasa

Dalam pah diterbalikkan-fasa, pH fasa mudah alih adalah secara amnya antara 2-7. Apabila analyte yang boleh dissociate di bawah keadaan diterbalikkan-fasa, atau apabila pH sampel adalah di luar julat 2-7, aPenampan garamDiperlukan. Sebatian yang boleh dissociate di bawah keadaan diterbalikkan-fasa secara amnya mempunyai kumpulan amino dan carboxyl, dengan nilai-nilai pKa antara 1-11. Memilih pH penampan yang betul boleh memastikan bahawa golongan berfungsi dissociated wujud dalam bentuk ionik atau bentuk sebatian neutral. Jika pH sampel berbahaya kepada lajur, maka penyelesaian buffering boleh membuatnya lebih ringan atau mengurangkan bahaya. Julat toleransi pH untuk lajur berasaskan silika konvensional adalah 2-8. Garam elektrolit buffered biasa dikelaskan seperti berikut.

1. AlkaliPenampan garam

Aditif biasa termasuk ammonia dan triethylamine, kedua-duanya boleh meningkatkan pH air ke tahap yang sangat tinggi, cukup tinggi untuk membubarkan zarah gel silika. Oleh itu, mereka perlu digunakan dengan berhati-hati. Di samping itu, kedua-dua pelarut ini biasanya tidak mudah dikeluarkan melalui kaedah mencuci dan penyelenggaraan. Terutamanya untuk triethylamine, walaupun ia adalah kesucian kromatografi, ia mungkin tercemar kerana kemerosotan selepas tempoh penyimpanan yang panjang.

2. BerasidPenampan garam

1. Asid formik: biasanya digunakan pada kepekatan di bawah 1%, ia boleh meningkatkan pH air hingga sekitar 2.

2. Asid asetik: sedikit kurang berasid daripada asid formik, biasanya digunakan pada kepekatan yang tidak melebihi 5%, ia boleh meningkatkan pH air kepada kira-kira 2.

3. Asid Trifluoroacetic: asid yang agak kuat, biasanya digunakan pada kepekatan yang tidak melebihi 0.5%, ia boleh mengurangkan pH air ke bawah 2. Ia mempunyai keamatan ion yang besar dan kesan pasangan ion tertentu, dan sering digunakan sebagai bahan tambahan apabila menganalisis protein dan peptida. Masalah paling membawa maut asid tiga ini berada dalam penyerapan UV mereka pada panjang gelombang yang rendah. Ia biasanya tidak disyorkan untuk menggunakannya pada panjang gelombang kurang daripada 215nm. Di samping itu, asid formik, asid asetik, dan asid trifluoroacetic tidak menentu dan kepekatan iniGaram elektrolit bufferedBoleh berubah dari masa ke masa.

4. Asid fosforik: ini adalah asid yang tidak menentu dengan keamatan ion yang baik. Perkara yang paling penting ialah tiada penyerapan latar belakang di kawasan UV yang rendah. Walau bagaimanapun, ia juga mempunyai beberapa kelemahan, seperti yang tidak serasi dengan kaedah spektroskopi jisim. Di samping itu, terdapat beberapa asid lain, seperti asid sulfurik, asid hidroklorik, atau asid sitrik, tetapi mereka jarang berlaku.

3. GaramPenampan garam

Berbanding dengan penampan asid-asas yang mudah, dengan menyesuaikan perkadaran dua garam yang berbezaPenampan garam, Penyelesaian penampan dengan pH tertentu boleh disediakan dengan mudah, dan garam penampan dengan keupayaan buffering boleh mengawal nilai pH fasa mudah alih.

1. Garam Formate: garam formate yang biasa digunakan dalam kromatografi cecair adalah ammonium formate. Garam jenis ini mempunyai keterlarutan yang baik, adalah benar-benar serasi dengan kaedah spektroskopi jisim cecair, dan mempunyai kesan yang agak kecil pada kolum chromatographic. Walau bagaimanapun, kelemahan adalah bahawa keamatan ion adalah agak rendah. Di samping itu, garam formate terdedah kepada deliquescence, menjadikannya sukar untuk menimbang dan berpotensi tidak menentu dalam fasa mudah alih. Apabila digabungkan dengan asid formik, sistem penampan formik asid-ammonium formate boleh mencapai keupayaan buffering dalam lingkungan pH 3 ~ 4.5, hanya dengan melaraskan nisbah kedua-duanya.

2. Acetate garam: contoh biasa adalah ammonium acetate. Penggunaan garam asetat adalah serupa dengan garam formate, dan keamatan ion tidak tinggi. Sistem penampan asid-ammonium asetat asetik boleh mengawal pH dalam pelbagai 4 ~ 5.5.

3. Garam fosfat: salah satu penyelesaian penampan yang paling biasa digunakan di HPLC di bawah keadaan pengesanan UV kerana ia boleh digunakan pada panjang gelombang di bawah 220 nm. Garam fosfat mempunyai tiga nilai pKa. Walaupun ia digunakan secara meluas, perhatian mesti dibayar kepada isu-isu keterlarutan mereka untuk menghalang mereka daripada precipitating dalam pam HPLC atau kolum chromatographic di bawah syarat-syarat tinggi-kepekatan.

Garam natrium dan kalium asid fosforik biasanya digunakan, dan keupayaan kawalan pH kedua-duanya adalah sangat serupa, dengan hanya sedikit perbezaan dalam keamatan ion. Dalam kebanyakan kes, mereka boleh digunakan secara bergantian. Kerana asid fosforik adalah asid polybasic, ia boleh membentuk monohydrogen fosfat dan fosfat dihydrogen, jadi penggunaan sistem penampan fosfat untuk menyesuaikan pH lebih fleksibel dan boleh meliputi pelbagai, dan boleh memberikan keamatan ion yang tinggi. Malangnya, sistem penampan fosfat untuk fasa mudah alih tidak serasiLe dengan spektroskopi jisim.