Analisis mengenai penggunaan Pfizer/BioNTech penampan HEPES tanpa RNase dalam pembuatan vaksin COVID-19

Pfizer/BioNTech menggunakan penampan HEPES tanpa RNase semasa pembuatan vaksin mRNA COVID-19

Laporan kajian EMA untuk vaksin COVID-19 Pfizer/BioNTech menyebut bahawa pembuatan bahan aktif untuk vaksin BNT162b2 terdiri daripada lima langkah utama. Antaranya, molekul RNA disintesis dari DNA linear oleh anIn vitroTranskripsi (IVT)

Diikuti dengan pemurnian dan penapisan pelbagai langkah.

Laporan itu mencadangkan bahawa penaja melaksanakan strategi ujian untuk memastikan kawalan mikrob yang mencukupi bahan permulaan dan penampan HEPES dalam formulasi penampan adalah RNase percuma.

Mengenai spesifikasi excipient, laporan itu menyatakan bahawa pemprosesan bantuan etanol dan asid sitrik penampan perlu dikawal mengikut Pharmacopoeia eropah (Ph.Eur.), dengan spesifikasi HEPES buffer dan EDTA yang ditetapkan terhadap bahan aktif.

Dari atas, Pfizer/BioNTech digunakan HEPES penampan dalam pembuatan vaksin mRNA COVID-19. Laporan kajian juga menekankan perlunya HEPES penampan supaya RNase percuma.

Berdasarkan kertas terakhir penggubalan LPX-mRNA yang diterbitkan oleh BioNTech pada tahun 2016, HEPES penampan telah digunakan dalam penyelesaian saham mRNA syarikat. Ia boleh disimpulkan bahawa BioNTech digunakan HEPES sebagai sistem penampan untuk penyelesaian saham RNA semasa pembuatan vaksin mRNA COVID-19.

Terdapat banyak kajian HEPES sebagai penampan bagi reaksi IVT

HEPES telah digunakan sebagai penampan dalam penyelesaian saham mRNA, yang mungkin berkait rapat dengan IVT RNA polymerase.

Penggunaan pasangan penampan HEPES untuk tindak balas IVT dilaporkan dalam kajian seawal tahun 1987. Dalam kajian ini, RNA polymerase virus nekrosis hematopoietic berjangkit (IHNV) disiasat untuk IVT di bawah keadaan tindak balas yang berbeza. Keputusan menunjukkan bahawa penampan HEPES boleh memaksimumkan kecekapan IVT berbanding dengan penampan Tris.

Kajian menunjukkan bahawa, berbanding denganTromethamine TRIS penampan, Sintesis RNA adalah tiga kali ganda lebih tinggi apabila HEPES digunakan sebagai penampan (rajah 1a), dan kepekatan optimum penampan HEPES adalah 400 mM.

Robin Shattock, pengarah jabatan penyakit berjangkit di Imperial College of Science, teknologi dan perubatan, adalah pakar berwibawa dalam bidang vaksin mRNA dan bekerja dengan kerjasama rapat dengan BioNTech, PNI dan lain-lain syarikat biopharmaceutical yang terkemuka. Pasukannya menerbitkan kertas mengenai pengoptimuman IVT saRNA pada tahun 2021 dan menyatakan bahawa penggunaan 40 mM HEPES sebagai penampan bagi reaksi IVT menyumbang kepada kecekapan IVT yang lebih tinggi. Kesimpulan telah dibuat oleh pemeriksaan dan menyiasat faktor-faktor utama yang mempengaruhi IVT saRNA.

Menurut kertas terakhir formulasi LPX-mRNA yang diterbitkan oleh BioNTech pada tahun 2016, penimbal yang digunakan dalam penyelesaian saham mRNA syarikat adalah HEPES. Dalam kajian ini, RNA-LPX telah disediakan dengan menyediakan penyelesaian saham RNA 1 mg/mL menggunakan penampan HEPES.

Menurut kesusasteraan yang berkaitan, HEPES mempunyai kelebihan sebagai penampan untuk reaksi IVT, yang kami percaya adalah sebab mengapa BioNTech menggunakan pasangan penampan HEPES sebagai sistem penampan untuk penyelesaian stok mRNA.

Kelebihan utama HEPES berbanding dengan sistem penampan lain

1. pKa HEPES berbeza sedikit dengan suhu, dan pH beralih sedikit dengan suhu.

2. Sifat-sifat yang stabil. HEPES, dalam satu tangan, tidak kompleks dengan ion-ion lain dan menjejaskan fungsi ion lain; Di sisi lain, kehadiran ion-ion lain tidak menjejaskan kapasiti buffering HEPES.

3. pH dalam medium budaya sel terutamanya dikekalkan oleh bicarbonate dan 5% CO₂Dalam medium. Apabila sel-sel berada dalam persekitaran terbuka, CO₂Melarikan diri boleh membawa kepada peningkatan pesat dalam pH daripada julat fisiologi, tetapi ia bukan issUe untuk media ditambah dengan pasangan penampan HEPES.

4. HEPES tidak boleh dengan mudah menyeberang biofilms dan tidak mengganggu tindak balas biokimia dalam sel.

Langkah berjaga-jaga untuk menggunakan sistem penampan HEPES

1. Oleh kerana kehadiran piperazine moiety, H₂O₂Dihasilkan apabila HEPES terdedah kepada cahaya, yang toksik kepada sel-sel berbudaya atau bahan aktif biologi lain. HEPES tidak boleh digunakan dalam kombinasi dengan bahan sensitif redoks. HEPES sebagai penampan yang harus digunakan daripada cahaya matahari langsung.

2. HEPES biasanya digunakan pada kepekatan 10-25 mM dalam produk biokimia. Ia mempunyai kapasiti buffering lemah apabila kepekatan lebih rendah daripada 10 mM, dan mungkin mempunyai kesan toksik pada beberapa sel apabila kepekatan lebih tinggi.

AVT LtdMembekalkan trehalose parenteral-gred, sukrosa, TRIS/TRIS-HCl penampan, penampan HEPES dan penyelesaian bioprotectants dan penampan lain secara kekal. KamiDNase & RNase-percumaProduk gred parenteral dengan endotoxin ultra rendah dihasilkan mengikut GMP semasa, dan telah didaftarkan di China dan amerika, memenuhi piawaian farmakopoeia negara-negara utama. Dengan produk kami, kami menyumbang kepada pembuatan dan pendaftaran anda di China dan/atau negara-negara lain vaksin protein recombinant, vaksin mRNA, vaksin vektor adenovirus, liposomes, antibodi tunggal dan berganda, adc dan ubat biologi lain!

Rujukan:

1. Fuko KURATH * t, LEONG J C. Transkripsi dalam vitro Virus nekrosis Haematopoietic berjangkit, Rhabdovirus ikan [J]. Jurnal virologi am, 1987(68): 1767-1771.

2. Samnuan K, Blakney AK, McKay PF, Shattock RJ. Reka bentuk eksperimen dalam transkripsi Vitro menghasilkan pengoptimuman diri Amplifying RNA. bioRxiv; 2021.

3. Laporan penilaian EMA, nama biasa: vaksin mRNA COVID-19 (nucleoside-modified).